青海fish检测品牌企业「英瀚斯」

分子生物学服务

 公司建有100平米分子实验室，配备有PCR仪、定量PCR仪、电泳仪、恒温培养箱、恒温摇床、垂直电泳仪、蛋白转印仪、蛋白发光成像仪等设备。往每个EP管中加入250ul，剧烈震荡30s，冰上静置12min[问l。分子组技术人员毕业于中国农业大学、华中科技大学同济***院、浙江理工大学等高校生物***相关，全部具有硕士研究生以上学历，熟练掌握分子生物学相关实验，可开展多种分子生物学检测服务。

miRNA测序

microRNA(miRNA)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。以***小点面积30，平滑度2为主要参数***大限度检测蛋白质点。microRNA通过和靶***mRNA碱基配对引导沉默复合体（RISC）降解mRNA或***mRNA的翻译，从而在转录后水平调控蛋白表达（新发现miRNA也能在转录水平调控***表达）。miRNA在物种进化中相当保守，在动物、植物和***等中发现的miRNA表达均有严格的***特异性和时序性。miRNA在细胞生长和发育过程中起多种作用，包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。

目前研究miRNA的方法主要是realtime-PCR、生物芯片技术以及第二代测序技术。实验流程：细胞收集-细胞裂解，蛋白提取-蛋白变性-SDS-PAGE电泳-蛋白质转膜印记-蛋白封闭-目的孵育-二抗孵育-显色拍照结果示例：图A不同大小的质粒转染细胞后，Westernblot检测图片。基于第二代测序技术的miRNA测序，可以一次获得数百万条miRNA序列，能够快速鉴定出不同***、不同发育阶段、不同***状态下已知和未知的miRNA及其表达差异，为研究miRNA对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。

蛋白质定量组学服务

细胞内蛋白质组丰度的动态变化对不同生命过程有重要影响。随后设计BSP引物进行PCR，在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定，***后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生jia基化，称为BSP-直接测序法。例如在许多***的发生和发展进程中，常常伴随着某些蛋白质的表达异常。目前定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)策略和非标记的(label free)定量策略，其中标记策略又分为体内标记(如 SILAC、15N 标记)，以及体外标记(如 iTRAQ、TMT 标记) 。

传统的基于2D双向凝胶电泳分离的蛋白质组通常可以鉴定出约1000种蛋白，对全蛋白质组的覆盖仅在5~10%左右，不能满足高通量定量蛋白质表达谱分析的要求。在测定时，受检标本(测定其中的抗ti或抗原)与固相载体表面的抗原或抗ti起反应，洗涤使固相载体上形成的抗原抗ti复合物与液体中的其他物质分开，再加入酶标记的抗原或抗ti，通过反应使其结合在固相载体上。我们结合样品制备与高分辨率、高灵敏度的液相色谱-质谱联用技术，可在细胞与***类样品中鉴定直至多于10000个蛋白，对全蛋白质组的覆盖>60%。结合生物信息学分析，为您构建高通量蛋白质定量表达谱。

RNA提取及注意事项

研究***的表达和调控时，需要从***或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低经常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。

主要***

Trizol是一种新型总RNA抽提***，内含异***胍等物质，能迅速破碎细胞，***细胞释放出的核酸酶。

1.

Trizol***含有，具***性和刺激性，注重操作。

2.

RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉，注重配带手套，样品尽可能盖严。

3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低后得率，因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质（结缔***和骨除外）。在清洗和裂解细胞时在低温下操作，防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。

4. 酵母和一些***由于细胞壁的特别结构，可以加入Trizol***同时加入无RNase的玻璃珠并剧烈振荡，使细胞裂解充分。

2-8℃ 避光保存一年。