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发布时间:2021-11-21 06:20:17
高l效液相色谱法检验方法
高l效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相,用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,得到测定结果。SNP是我们考察遗传变异的单位,据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离性能高,分析速度快的特点。
高l效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的***的分析测定,特别是多组分***的测定、杂质检查和大分子物质的测定。线粒体的组成可以从两个层面上反映物种及群体的遗传和进化,即核酸序列组成和***组的结构特征,两者的特征具有不同的进化机制和进化速度,在进化生物学研究中可以很好的互补。有的***需要在色谱分离前或后经过衍生化反.应,方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有硅胶用于正相色谱;化学键合固定相,根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱,其中常用的是十八***硅l烷(又称ODS)键合硅胶,可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料,用于离子交换色谱,是有一定孔径的大孔填料,用于排阻色谱。
在玻璃烧杯中注入去离子水,加入DEPC使其终浓度为0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二焦碳酸酯为活性很强的物,须在通风橱中小心使用)
将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通风柜中37℃ 或室温下处理过夜。
将DEPC-H2O小心倒入废液瓶中,将装有DEPC- H2O 处理过的塑料制品的容器以铝箔封口,高温高压蒸汽灭菌至少30分钟。
灭菌塑料制品烘烤干燥,置洁净处备用。
玻璃和金属物品250 ℃烘烤3小时以上。
二、操作步骤:
1. 所有在纯化系统里使用的溶液当日都需要经过 0.22μm 的滤膜抽滤、脱气处理;保存 4℃ 冰箱里的缓冲液若要在室温使用需***至室温后抽滤脱气;
2. 样品上柱纯化前,需先滤膜过滤,少量样品可用离心(13000rpm,10min);
3. 依次用水、缓冲液洗泵;设置流速和柱前警报压(压力值参阅层析柱及填料说明书,取较小的一个大耐受压力)。防止柱中进入气泡,影响分离效果;
4. 当柱子限压在 0.3MPa,或者在限压状态下流速很低时,pH valve 中的 Restirtor 可以切换成 Off line,即显示 By-pass 状态;
5. 当需要通过仪器上样环上样时,将 W1 阀口处换成带透明短软管的阀门,从此处阀门位通过倒吸样品上样;
6. 进样阀「Inject」为上样状态。上样结束可将进样阀切换回「Load」状态。并用纯水认真清洗上样环至少 3 次;将 W1 阀口处换回原来接头阀门。
7. 纯化结束后,用纯水清洗泵和平衡柱子;再用 20% 的乙醇清洗泵以及系统。长期不用,层析柱应保存在 20% 的乙醇中,泵放置在 20% 乙醇中;
8. 实验结束后及时倾倒废液瓶里的废液;
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