山东临床前动物实验电镜检测 英瀚斯生物科技

实验步骤

1、实验之前，一定要确保高架十字迷宫整个装置的清洁。这个步骤不仅仅是要求当天的实验，更加侧重于每一次动物实验完成后的清洁除味工作，一定要去除上一只动物在宫体内遗留下来的尿液、粪便等，尽可能创造一个清洁、无味道的理想试验环境。同时，实验员需要记录动物的编号、日期、状态等信息；实验动物提前运送到行为学实验室临时笼架 ,

适应环境至少3H左右, 减少动物紧张。

2、将实验动物（大鼠或者小鼠）从饲养笼中取出，实验动物尽量背向实验员，将动物轻轻放在仪器宫体的***区域，动物面向开臂，然后实验员迅速安静的离开；

3、打开SuperMaze或者VisuTrack动物行为分析软件，跟踪动物在高架十字迷宫仪器内的轨迹运动，自动计算指标，通常实验时长为5min；

4、实验结束后，取出实验动物，放入饲养笼，做好实验完成动物的标记信息，同时，用酒精和纸巾清洁迷宫。

在各种致病因素作用下，大脑实质受到损伤后可出现***功能改变，如偏瘫、平衡失调等。

对于***系统***动物模型而言，造模结束只是步，验证个体模型是否成功是第二步，而控制组内个体特征一致性是第三步。

采用***功能评分是重要的观察指标，可以用来在体评价模型是否成功或者病变严重程度。尽量控制动物模型的评分一致性是很困难但不得不做的一件事。

这里介绍三种常见的啮齿类***功能评分方法。

一、【Longa评分法】

① 无***功能缺陷：0分；

②瘫痪侧前爪不能完全伸展：1分；

③行走时向瘫痪侧转圈：2分；

④行走时向瘫痪侧倾倒：3分；

⑤不能自动行走，存在意识丧失现象：4分。

二、【Bederson评分法】

抓起动物的尾巴，使动物离台面10cm高。此时，正常大鼠的前爪处于伸直状态，而存在***功能病变的动物则可出现如下表现：

②动物尾巴提起后，瘫痪侧前肢回收并屈于腹下，而正常侧肢体伸向台面：1分；

③除第二条表现以外，俯卧于台面时向瘫痪侧侧推动物的阻力较正常侧明显降低：2分；

④除条和第二条以外，动物行走时向瘫痪侧旋转：3分。

三、【平衡木评分法】

一根长为80cm、宽为2.5cm的木条，水平固定在离台面10cm高度的地方，然后让动物在木条上行走。

①能跳上平衡木条，可以自由行走但不跌倒：0分；

②能跳上平衡木条，动物在上面行走会跌下，但跌下的机会小于50%：1分；

③能跳上平衡木条，动物在上面行走会跌下，但跌下的机会大于50%：2分；

④动物在正常侧身体的帮助下可以跳上平衡木条；但是瘫痪侧的后肢不能够帮助身体向前移动：3分；

⑤动物无法在平衡木条上行走，但是可以坐在木条上：4分；

⑥将动物放在木条上，动物很快会掉落下来：5分。

五、注意事项

1．  小宫设备和实验程序与大鼠类似，但迷宫规格应比大宫小，以免增加小鼠行为操作难度。

2．  本实验也可只用来测定工作记忆。方法中不同的是，在所有臂均放置食粒，而不是只选4个臂放置食粒。

3．  慢性应激对动物的迷宫操作可产生影响，且存在性别差异。经过慢性应激以后，雄性大鼠***减弱，表现为记忆错误频率增加；雄性大鼠的空间记忆反而增强，表现为错误频率减少。

4．  即使在限制进食条件下，也应让大鼠体重每周增加5g，以免动物因营养不良而患病。剔除身体状态不良的动物。

5．  迷宫周围的任何一件物品均可被动物用来作为空间定为的标志。去除或移动这些标志可能使动物操作困难并降低迷宫臂选择的准确性。

2.2旋转圆筒睡眠剥夺法

此方法于 1979 年先应用于睡眠剥夺实验中，设备主要由一柱形圆筒及一小型慢速马达构成。圆筒直径 30 cm，高 30 cm 。圆筒底由 PVC (聚)构成，侧壁由直径为 10.4 m m 的 PVC 杆围成。杆长度 30 cm，杆之间间隔 15.5 m m，圆筒与小型马达相连。马达转速为每 45 s转 1 圈(也有学者应用每 m in 转 1 圈)。至少在实验前 2 d每天将大鼠放入圆筒中适应环境 1 次，适应时间不少于 3 h。实验时将马达按 45 s每1 圈进行匀速转动，通过圆筒的转动带动大鼠不停运动而达到睡眠剥夺的目的。此类方法简单易行，睡眠剥夺效果明显。缺点是长时间不停运动可引起机体的运动后应激反应及身体疲劳，可能干扰睡眠剥夺实验结果! 此类方法发展出多种变化，有实验者在进行新生大鼠睡眠剥夺时将筒旋转速调节至 2~3 r/m in后期逐渐增加至 6~7 r/m in。