动物实验外包DNA水平「多图」

难点与关键点

将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。

动物睡眠剥夺模型,睡眠剥夺是研究睡眠的功能与发生机制的重要方法。睡眠剥夺模型的选择将直接影响睡眠剥夺实验的可靠性及准确性对睡眠剥夺实验结果具有重要的影响。现将几种常用的睡眠剥夺模型的方法评价及进展情况综述如下。

1.平台睡眠剥夺技术

此类方法主要是利用大鼠畏水及在水中无法进入睡眠的生活习性，通过在盛水的水槽中放置平台，让大鼠站立在平台上，因平台直径足够小(直径 6.5 cm 或更小)当大鼠进入 REM 时，因全身肌张力降低引起节律性低头触水以此来达到剥夺 REM 的目的， 此类方法简单易行无需复杂昂贵的设备，在不同条件的实验室均能开展因而应用广泛 其主要用来剥夺大鼠的REM ，可分为以下三种方法：

1.1单平台睡眠剥夺法

此方法早于 1964 年被应用在猫的睡眠剥夺实验中，不久以后有人将此方法应用于大鼠的睡眠剥夺实验，，方法为将一圆柱形台 (直径约 65 m m )放置在长 400 mm宽340 m m高160 mm的水槽中，往水槽中加水至平台露出水面约 10 mm ，将 1 只大鼠置于台上，大鼠可在平台上站立，可进入 NREM，当大鼠进入 REM 时全身骨骼肌张力明显降低，颈部肌张力降低引起节律性低头触水从而无法进入 REM，采用 SP 实验可引起动物的体重及胸腺重量减轻，上腺重量增加，血浆中上腺皮质酮增加，动物攻击行为增加，机体反应***等。

5. 剥夺杆睡眠剥夺法

在标准实验室笼中采用间隙性的剥夺杆扫描进行触觉刺激来干扰自由行为的小鼠。该方法防止了人类接触和干预对睡眠剥夺的影响，并且在整个睡眠剥夺过程期间小化身体活动。此外，该程序准确且可预测。实验室动物从小都是在饲养笼中长大，基于实验室饲养笼使得动物能够保持在正常的社会环境中实施了一种相对无压力的方法来诱导动物睡眠剥夺模型，从而避免了外界环境及其他因素对睡眠剥夺的影响。此外，基于饲养笼式的睡眠剥夺仪易于组装和清洗，设计更加地人性化。