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自噬流检测

自噬是调节真核细鹏生长、和能量代谢的重要生物学机制。细胞自噬行使其生物学功能的前提是自噬流的话化。大量证据表明自噬流受损与多种慢性炎性***，特别是、***退行性***及***纤维化的发病密切相关，目前对于自噬液的检别是自噬与其相关***研究领域的热点。由于自噬流是一个曲多个步骤组成的动态过程。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL37预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。因此往需要精细的突验才能准确判断自啦流状态。

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、

病毒和***等。单丹磺酰尸胺(Dansylcad***erine,MDC是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm ,阻断滤光片波长512nm。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中，将细胞接种于小室中，利用培养液成分的差异诱导细胞运动，检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。Leagene MDC染色液适用于培养细胞的自噬染色，可与EB合用双染。

透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边.集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

结果评判:调亡细胞体积变小，细胞质浓缩。调亡I期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象( c***itati)的空泡结构; IIa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生调亡小体。5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。