新疆临床前动物实验蛋白水平「英瀚斯」

高架十字迷宫试验 ：

EPM ) 既可以建立焦躁应激的模型也是国际上公认的经典测量焦躁反应的方法。其原理是利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐 惧心理, 形成动物的矛盾冲突来考察大鼠的焦躁状态。 EPM 测试的项目中, 焦躁动物的 OE% 和 OT% 会明显降低, 经典抗焦躁药则使两者升高, OE + CE 反映了动物的运动活性。本研究发现模型组大鼠的 OE% 和 OT% 显著下降, 运动活性也降低。HD反映了动物在非保护区内的探索行为, 代表动物对陌生环境的好奇探究或因恐惧而寻求逃避, 与焦躁程度有一定相关性, 本研究中空瓶应激后的大鼠 HD行为减少; RR可用来观察药有无***作用及***强度。上述结果证实, 慢性应激后的大鼠明显处于焦躁状态, 说明慢性焦躁应激大鼠模型的制备成功, 且通过量化的标准客观反映出大鼠的焦l虑程度。

三、实验指标区域指标开臂1停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂2停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂3停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）其他臂停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）四、实验方法及应用

1) 动物适应实验环境1周后，称重，禁食24小时。此后每天训练结束后限制性地给予正常食料（据体重不同，大鼠16-20g，小鼠2-3g），以使体重保持在正常进食大鼠的80%~85%。

2) 第二天，迷宫各臂及***区分撒着食物颗粒（每只4~5粒，直径约3~4mm）。然后，同时将4只动物置于迷宫***（通往各臂的门打开）。让其自由摄食、探究10min。

3) 第三天，重复第二天的训练。这一过程让动物在没有很强的应激条件下熟悉迷宫环境。

4) 第四天起，动物单个进行训练：在每个臂靠近外端食盒处各放一颗食粒，让动物自由摄食。食粒吃完或10min后将动物取出。

5) 第五天，将食物放在食盒内，重复前一天的训练，一天2次。

6) 第六天以后，随机选4个臂，每个臂放一颗食粒；各臂门关闭，将动物放在迷宫***；30s后，臂门打开，让动物在迷宫中自由活动并摄取食粒，直到动物吃完所有4个臂的食粒。如经10min食粒仍未吃完，则实验终止。每天训练两次，其间间隔1h以上。

脑***组化实验

1. 灌注固定用的针头，一般都用***针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头，小鼠可用 6、7 号针头，但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。

2. 关于穿刺：灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内，但不宜进入升主动脉过长，在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可；灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可，不必要插入到升主动脉内。操作的要点是：，操作要迅速，剪开膈肌后，迅速沿腋前线剪开胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心脏；第二，一定要在明视野下操作，要剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部，确保穿剌针能进入升主动脉；第三，穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙，然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针；第四，穿刺方向要正确，从心尖部开始，从左下方斜向右上方，若遇阻力要改变方向再试，不要用力蛮插。

3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右，小鼠用 10ml 左右，一般以从右心耳流出的液体清亮为标准；4% 多聚甲醛用量约相当于老鼠体重，如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢，可持续 1-2 个钟头，也可以稍快。取脑后置脑块于 4% 多聚甲醛内 4 度后固定 4-6 个钟头。

1.3改良多平台睡眠剥夺法

在MMPM 中将 10 只大鼠(具体数目可根据实际需要确定)同时放在装有 14 或 15 个台的水槽中(长 127 cm ，宽 44 cm ，高 45 cm )进行实验，这样既避免了 SP及M P中单只大鼠与群体隔离的缺点，又保留了 M P 中活动范围增大的特点，因在实验时大鼠多是 3 只或 4 只一笼进行饲养，如 1 组实验需 10 只大鼠，则需要3笼或 4笼大鼠，考虑到来自不同笼的大鼠放在一起实验也可能造成群体的不稳定，有学者将实验方法进一步改良，将实验所需的 10 只大鼠放在同一只笼中饲养 2 周，实验时再将这些大鼠放在一起同时进行睡眠剥夺实验，这样以克服实验时大鼠群体不稳定的缺点，从而将实验时的不确定因素减至低! 实验研究发现在MMPM中'经采取措施保持大鼠群体稳定性及避免大鼠与群体分离后' 大鼠上腺重量%体重减轻量%中促上腺皮质(A CTH )和上腺皮质酮 (CO RT) 的含量均较M P中为低，提示M M PM 较 M P 具有更低的应激性，是较为理想的REM 剥夺方法。