甘孜临床前动物实验增殖能力检测「多图」

五、注意事项

1．  小宫设备和实验程序与大鼠类似，但迷宫规格应比大宫小，以免增加小鼠行为操作难度。

2．  本实验也可只用来测定工作记忆。方法中不同的是，在所有臂均放置食粒，而不是只选4个臂放置食粒。

3．  慢性应激对动物的迷宫操作可产生影响，且存在性别差异。经过慢性应激以后，雄性大鼠***减弱，表现为记忆错误频率增加；雄性大鼠的空间记忆反而增强，表现为错误频率减少。

4．  即使在限制进食条件下，也应让大鼠体重每周增加5g，以免动物因营养不良而患病。剔除身体状态不良的动物。

5．  迷宫周围的任何一件物品均可被动物用来作为空间定为的标志。去除或移动这些标志可能使动物操作困难并降低迷宫臂选择的准确性。

灌注固定主要用于***系统，其他***意义不是很大，而且耗时耗力。对***系统防止变性效果较好！

小鼠灌注

灌流固定小鼠时一般采用输液器的针头 (4 号半，这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白，针头要从心轴方向进针，然后刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了，开始灌流后剪破右心耳，约 40 毫升生理盐水，后再灌流约 20 毫升多聚甲醛，整个灌流固定的过程就完成了。

脑***组化实验

1. 灌注固定用的针头，一般都用***针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头，小鼠可用 6、7 号针头，但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。

2. 关于穿刺：灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内，但不宜进入升主动脉过长，在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可；灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可，不必要插入到升主动脉内。操作的要点是：，操作要迅速，剪开膈肌后，迅速沿腋前线剪开胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心脏；第二，一定要在明视野下操作，要剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部，确保穿剌针能进入升主动脉；第三，穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙，然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针；第四，穿刺方向要正确，从心尖部开始，从左下方斜向右上方，若遇阻力要改变方向再试，不要用力蛮插。

3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右，小鼠用 10ml 左右，一般以从右心耳流出的液体清亮为标准；4% 多聚甲醛用量约相当于老鼠体重，如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢，可持续 1-2 个钟头，也可以稍快。取脑后置脑块于 4% 多聚甲醛内 4 度后固定 4-6 个钟头。

注意事项

1. 针头大小与动物的种类有关，t 同时针头一定要磨钝。

2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞。

3. 经腹腔暴腔，先清楚升主动脉外面的脂肪***和心外膜***。

4. 将针头经左心室插入升主动脉（颜色变白的哦），并用钳子固定。

5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其。

6. 将 4 度的生理盐水（好已动物的发白为标准，我们实验室的大鼠约用 250ml）和多聚甲醛 (根据所取得材料而定) 依次灌入。

7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。