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难点与关键点

将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。

注意事项

1. 针头大小与动物的种类有关，t 同时针头一定要磨钝。

2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞。

3. 经腹腔暴腔，先清楚升主动脉外面的脂肪***和心外膜***。

4. 将针头经左心室插入升主动脉（颜色变白的哦），并用钳子固定。

5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其。

6. 将 4 度的生理盐水（好已动物的发白为标准，我们实验室的大鼠约用 250ml）和多聚甲醛 (根据所取得材料而定) 依次灌入。

7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。

动物睡眠剥夺模型,睡眠剥夺是研究睡眠的功能与发生机制的重要方法。睡眠剥夺模型的选择将直接影响睡眠剥夺实验的可靠性及准确性对睡眠剥夺实验结果具有重要的影响。现将几种常用的睡眠剥夺模型的方法评价及进展情况综述如下。

1.平台睡眠剥夺技术

此类方法主要是利用大鼠畏水及在水中无法进入睡眠的生活习性，通过在盛水的水槽中放置平台，让大鼠站立在平台上，因平台直径足够小(直径 6.5 cm 或更小)当大鼠进入 REM 时，因全身肌张力降低引起节律性低头触水以此来达到剥夺 REM 的目的， 此类方法简单易行无需复杂昂贵的设备，在不同条件的实验室均能开展因而应用广泛 其主要用来剥夺大鼠的REM ，可分为以下三种方法：

1.1单平台睡眠剥夺法

此方法早于 1964 年被应用在猫的睡眠剥夺实验中，不久以后有人将此方法应用于大鼠的睡眠剥夺实验，，方法为将一圆柱形台 (直径约 65 m m )放置在长 400 mm宽340 m m高160 mm的水槽中，往水槽中加水至平台露出水面约 10 mm ，将 1 只大鼠置于台上，大鼠可在平台上站立，可进入 NREM，当大鼠进入 REM 时全身骨骼肌张力明显降低，颈部肌张力降低引起节律性低头触水从而无法进入 REM，采用 SP 实验可引起动物的体重及胸腺重量减轻，上腺重量增加，血浆中上腺皮质酮增加，动物攻击行为增加，机体反应***等。