***动物实验外包电镜检测 南京英瀚斯生物科技

实验动物的抓取和固定

在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。动物实验室内的温度、湿度、照度、噪声、洁净度等饲养环境应符合***相关标准的要求。抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要爱惜动物，使动物少受痛苦。

实验动物的给法

(一)***给药法

1. 皮射 ***时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持将针头刺入,固定后即可进行***。病理***学检查模型大鼠在发生早期(1周以内)主要是肺泡上皮细胞发生了***，而在晚期阶段则可见Ⅱ型肺泡上皮细胞增多，以及肺泡间隔内局限性胶原纤维及弹性纤维的聚集。一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或侧下腹部；豚鼠在后大腿内侧、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部***；蛙可在脊背部淋巴囊***；狗多在大腿外侧***，拔针时，轻按片刻，防药液逸出。

2. 皮内*** 此法用于观察皮肤血管的通透性变化或观察皮内反应。(三)胰液和胆汁在动物实验中，主要是通过对胰总管和胆总管的插管而获得胰液或胆汁。 如将一定量的性同位素溶液、颜料或致炎物质、等注入皮内，观察其消失速度和局部血液循环变化，作为皮肤血管通透性观察指标之一。方法是：将动物***部位的毛剪去，消毒后，用皮试针头紧贴皮肤皮层刺入皮内，然后使针头向上挑起并再稍刺入，即可***药液。***后可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。

3. 肌肉*** 当给动物***不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的时,常采用肌肉***。肌肉***一般选用肌肉发达、无大血管经过的部位，多选臀部。

***时针头要垂直快速刺入肌肉，如无回血现象即可***。给大、小鼠作肌肉***时，选大腿外侧肌肉进行***。

4. 腹腔*** 先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。此法大小鼠用的较多。

5. 静脉*** 是将药液直接***于静脉管内，使其随着血液分布全身,迅速奏效。但排泄较快，作用时间较短。

小鼠、大鼠的静脉***：常采用尾静脉***。此外，实验中使用雄性动物雄鼠是因为雄性动物在向gan硬化转化过程中比雌性动物更为均一。鼠尾静脉共有3根， 左右两侧和背侧各1根，两侧尾静脉比较容易固定，故常被采用。操作时，先将动物固定在暴露尾部的固定器内(可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物代替),用75％酒精棉球反复擦试使血管扩张, 并可使表皮角质软化，以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧，使静脉充盈,***时针头尽量采取与尾部平行的角度进针。

4种肺动脉高压(PH)动物模型肺血管重构模式的差异

方法:雄性SD大鼠(350-400g),分别通过腹主动脉-腔静脉分流(A-VF,n=10)、左肺切除(PE,n=10)、野百合碱***(MCT,n=10)、左肺切除+MCT(PE+MCT,n=12)4种方法建立PH模型.检测平均肺动脉压力(mPAP)、RV/(LV+S)重量比值、肺小动脉中膜厚度百分比(WT%)、无肌性动脉肌化程度和新生内膜(neointima)形成、新生内膜增殖度和血管阻塞计分(VOS).

结果:在PE+MCT组(肺切除术后5周,MCT***后4周)右肺腺泡内血管出现了新生内膜病变,其它组均没有新生内膜病变形成.PE+MCT组的动物出现了严重的右心室肥大,动脉中膜明显增厚,平均肺动脉压(mPAP)和无肌性血管肌化程度显著增加;A-VF、PE和MCT组仅形成轻-中度的右心室肥大、mPAP升高和小动脉肌化.结论:左肺切除联合应用MCT能成功诱导大鼠PH新生内膜模型,该模型能更好地模拟人类严重PH的病理改变,是研究梗阻性PH更为适用的动物模型.

Y迷宫主要应用于动物的辨别性学习，工作记忆及参考记忆的测试。也可用锋利刀片割破尾动脉或尾静脉，让血液自行流出，采血后，消毒，止血。Y迷宫由三个完全相同的臂组成。每个臂尽头有食物提供装置，根据分析动物取食的策略即进入各臂的次数、时间、正确次数、错误次数、路线等参数可以反映出实验动物的空间记忆能力。相对而言，Y迷宫简便、可行，相对八臂迷宫来说更加简单，有一定的实用性，现常用于学习记忆功能评价。

Y迷宫、八臂迷宫这类食物奖赏型迷宫任务能够检测啮齿类动物与海马和前额叶脑区相关的空间参考记忆和空间工作记忆。以PEF值小于对照组的大鼠80%PEF值为存在气流受限的界线，则4周组、6周组、8周组出现气流受限的鼠分别为0只(0)、6只(75%)及8只(100%),6周组及8周组的大鼠气流受限发生率显著高于4周组(P<。当动物在迷宫中寻找食物时，动物需要根据迷宫周围的视觉标示，记住它已搜寻过的迷宫臂，以避免重复进入同一个臂，从而有效地获得食物。这种类型的记忆能指导进行中的行为，被称为工作记忆。

  Y迷宫实验模型用来研究啮齿类动物的空间识别记忆能力，这相对于被动回避等实验的优点在于：这种迷宫利用了啮齿类动物对新异环境天然探究的自然习性，不需要动物学习任何规则来趋利避害，能够有效地反映出动物对新异环境的识别记忆能力。