甘肃动物实验课题外包自噬凋亡检测「英瀚斯」

动物模型设计的注意事项

注意模型要尽可能再现所要求的人类***

模型时必须强调从研究目的出发，熟悉诱发条件、宿主特征、***表现和发病机理，即充分了解所需动物模型的全部信息，分析是否能得到预期的结果。例如诱发动脉粥样硬化时，草食类动物兔需要的胆固醇剂量比人高得多，而且病变部位并不出现在主动脉弓。病理表现为纤维***和平滑肌为主，可有大量泡沫样细胞形成斑块，这与人类的情况差距较大。因此要求研究者懂得，各种动物所需的诱发剂量、宿主年龄、性别和遗传性状等对实验的影响，以及动物***在***学、生化学、病理学等方面与人类***之间的差异。要避免选用与人类对应相似性很小的动物***作为模型材料。如要进行***或心脏采血应先ma醉再操作,如进行解剖实验则必须先无痛处死后再进行。为了增加所动物***模型与人类***的相似性，应尽量选用各种敏感动物与人类***相应的动物模型，可参考相关文章《各种敏感动物与人类相似的***模型》。

实验动物的给法

(一)***给药法

1. 皮射 ***时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持将针头刺入,固定后即可进行***。一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或侧下腹部；豚鼠在后大腿内侧、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部***；多样硬化模型（EAE）EAE模型可由来自髓鞘的蛋白如髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG))和完全弗氏佐剂(CFA)免yi诱导，mian疫当天及两天后腹腔***百ri咳毒su(PTX)而构建。蛙可在脊背部淋巴囊***；狗多在大腿外侧***，拔针时，轻按片刻，防药液逸出。

2. 皮内*** 此法用于观察皮肤血管的通透性变化或观察皮内反应。 如将一定量的性同位素溶液、颜料或致炎物质、等注入皮内，观察其消失速度和局部血液循环变化，作为皮肤血管通透性观察指标之一。方法是：将动物***部位的毛剪去，消毒后，用皮试针头紧贴皮肤皮层刺入皮内，然后使针头向上挑起并再稍刺入，即可***药液。***后可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。将动物固定，显露尾部，将尾尘剪去约5mm，从尾根部向尾端部，血即从断端流出。

3. 肌肉*** 当给动物***不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的时,常采用肌肉***。肌肉***一般选用肌肉发达、无大血管经过的部位，多选臀部。

***时针头要垂直快速刺入肌肉，如无回血现象即可***。给大、小鼠作肌肉***时，选大腿外侧肌肉进行***。

4. 腹腔*** 先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。此法大小鼠用的较多。

5. 静脉*** 是将药液直接***于静脉管内，使其随着血液分布全身,迅速奏效。但排泄较快，作用时间较短。

小鼠、大鼠的静脉***：常采用尾静脉***。鼠尾静脉共有3根， 左右两侧和背侧各1根，两侧尾静脉比较容易固定，故常被采用。操作时，先将动物固定在暴露尾部的固定器内(可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物代替),用75％酒精棉球反复擦试使血管扩张, 并可使表皮角质软化，以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧，使静脉充盈,***时针头尽量采取与尾部平行的角度进针。小鼠悬尾实验：悬尾小鼠为克服不正常体位而挣扎活动，但活动一定时间后，出现间断性不动，显示“绝望”状态，多数抗抑郁药可有效缩短小鼠的不动时间。

实验动物各种体液、的采集方法

消化液的采集

(一) 唾液

1. 直接抽取法 在急性实验中， 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液，此法非常简单，但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。

2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液，要用***方法将腮腺导管开口移向体外，即以腮腺导管为中心，切成一直径约2～3cm的圆形粘膜片，将此粘膜片，与周围***分开，穿过皮肤切口引到颊外,将带有导管开口的粘膜片与周围的皮肤缝合,腮腺分泌的唾液就流出颊外。这种方法可以收集到较纯净的唾液。NT9组和NT18组大鼠美加明激发后出现更多的戒断症状(P<。

(二)胃液

1. 直接收集胃液法 急性实验时，先将动物，将插胃管经口插入胃内,在灌胃管的出口连一，用此可收集到胃液,此法适用于狗等大型动物。如是大鼠,需***剖腹，从幽门端向胃内插入一塑料管，再由口腔经食道将一塑料管插入前胃，用pH7.5、35℃左右的生理盐水，以12ml/h的流速灌胃，收集流出液，进行分析。有无血尿、远处转移等)和生存期,并对si亡小鼠进行解剖,留取膀胱。

2. 制备胃瘘法 在慢性实验中,收集胃液多用胃瘘法,如全胃瘘法、巴氏小胃瘘法、海氏小胃瘘法等。制备小胃是将动物的胃分离出一小部分，缝合起来形成小胃，主胃与小胃互不相通，主胃进行正常消化，从小胃可收集到纯净的胃液。应用该法，可以待动物***健康后，在动物清醒状态下反复采集胃液。实验动物科学诞生于本世纪五十年代初期，现在已发展成为一门***的、综合性的基础科学，它是融合生物学、动物学、兽***和***等科学，并引用了其它自然科学的成就发展起来的。

(三)胰液和胆汁

在动物实验中，主要是通过对胰总管和胆总管的插管而获得胰液或胆汁。狗的胰总管开口于十二指肠降部，在紧靠肠壁处切开胰管，结扎固定并与导管相连，即可见无色的胰液流入导管。大鼠的胰管与胆管汇集于一个总管，在其入肠处插管固定，并在近肝门处结扎和另行插管，可分别收集到胰液和胆汁。结果：随着NR8383细胞培养液中加入PGE2浓度增gao，其VEGF蛋白表达和VEGFmRNA的表达水平显著升高（P<。

有时也可通过制备胰瘘和胆囊瘘来获得胰液和胆汁。

睡眠剥夺模型

实验用金属箱直径35 cm， 每箱装1只大鼠。REMSD 各组分别置于直径为6.5 cm的小站台上，对照组大鼠置于直径15 cm的大站台上，周围是水环境,水深3 cm，平台在水面以上1 cm，于平台以上14 cm 处放笼罩，上面放水和食物。水温和室温保持在25 C，每日换水并打扫实验箱。REMSD 组大鼠在小台上屈曲而立，在快动眼睡眠(rapid eye movement sleep， REMS) 时，由于伴随全身肌肉松弛和节律性垂头，大鼠落入水中而惊醒，再爬上站台。动物模型的设计原则重复性理想的动物模型应该是可重复的，甚至是可以标准化的。用此方法自18:00开始连续剥夺大鼠的REMS至相应实验时间点。

 旷场实验( open field test， OFT )

实验装置为高60 cm、 底面边长100 cm、内壁涂黑的无盖方箱，底面平均分为25个小方格，正上方2 m处架一摄像机，镜头对准箱底，实验在安静环境下进行，大鼠置于方箱底面中心，同时进行摄像和计时，3 min 后停止摄像,更换动物后，继续进行实验。2次实验之间清洗箱壁及底面，以免上次动物余留的信息影响下次实验结果。计分方法:通过放像设备，观察大鼠3 min内越过的格子数为水平得分，后肢站立次数为垂直得分，两者之和为OFT总得分。REMSD实验前后均进行旷场实验。KA的人工合成品即合成红藻氨酸(syntheticalkainicacid,SKA)腹腔***。