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实验原理

高架十字迷宫（the elevated plus maze,EPM）是评价啮齿类动物焦躁反应的实验方法 , 相较伤害性刺激所致小鼠焦躁行为检测（如电刺激 、 噪声刺激 、 饮食剥夺和暴露在捕食者气味等）, 该实验具有操作简单的优点 , 能直观反映小鼠的条件应答 。 EPM实验是在高架Y型迷宫的基础上发展而来的 。 EPM由开臂（open arms和闭臂（closed arms）各两条组成 , 呈十字形交叉 , 交义部分为***区 , 距地面有一定高度 。其原理是由于面对新事物开臂 小鼠会产生好奇心去探究 , 而它们有嗜暗的天性（闭臂）, 两者之间发生探究与回避的冲突行为，产生焦躁心理。整个迷宫距离地面的高度相当于人类站在悬崖边，易导致动物产生恐惧不安的心理。可以通过对比小鼠在开臂和闭臂内的滞留时间和路程来评价小鼠的焦躁行为。

EPM实验在***开发和研究中得到广泛的应用：主要用于苯二氮卓类***的抗焦躁作用研究 及筛选具有抗焦l虑作用的新药,也被用于研究精神性***滥用的影响及激s素的功能,应激对生殖、***、妊s娠的影响等。抗焦l虑药主要选择性地***边缘系统 的海马、杏仁核 ,产生抗焦躁作用。

实验步骤

1、实验之前，一定要确保高架十字迷宫整个装置的清洁。这个步骤不仅仅是要求当天的实验，更加侧重于每一次动物实验完成后的清洁除味工作，一定要去除上一只动物在宫体内遗留下来的尿液、粪便等，尽可能创造一个清洁、无味道的理想试验环境。同时，实验员需要记录动物的编号、日期、状态等信息；实验动物提前运送到行为学实验室临时笼架 ,

适应环境至少3H左右, 减少动物紧张。

2、将实验动物（大鼠或者小鼠）从饲养笼中取出，实验动物尽量背向实验员，将动物轻轻放在仪器宫体的***区域，动物面向开臂，然后实验员迅速安静的离开；

3、打开SuperMaze或者VisuTrack动物行为分析软件，跟踪动物在高架十字迷宫仪器内的轨迹运动，自动计算指标，通常实验时长为5min；

4、实验结束后，取出实验动物，放入饲养笼，做好实验完成动物的标记信息，同时，用酒精和纸巾清洁迷宫。

6．  八臂迷宫实验方法根据实验目的的不同迷宫臂的数目可不同，包括8、16、24、32、40和48臂迷宫。迷宫臂越少要求动物记住探究过的臂也越小，动物的行为操作就越简单。增加臂的数目一方面增加了对动物空间记忆的要求，另一方面也引入了更多的、有必要考虑的干扰因素（例如过去的迷宫学习对目前所测记忆的影响）。所以，通常使用8臂迷宫，既可减少不必要的、过多臂的干扰，又可缩短训练和测试所花的时间。

7．  所用食物通常为小块的、带巧克力味（动物喜欢的味道之一）或甜味的早餐圈（每块10mg）；也可用液体食物（如巧克力奶或水）。后者对于测试某些影响动物对固体食物吞咽的尤为实用。

8．  影响动物迷宫操作主要有两大因素：对迷宫或观察者的恐惧与动物探究习性和已知放在迷宫臂内食物的驱使。恐惧因素过强会阻止动物的迷宫操作，使动物始终停留在迷宫的某一个地方而不去探究。缺乏对食物的渴求也会产生类似结果，增加对动物的抚摸，必要时加高迷宫臂的侧墙，有助于减少动物的恐惧。如食物的驱使作用不足，可减少食物量，但必须同时监测体重和一般身体状况。通常大鼠体重不应低于禁食前的80%；对多数大鼠，体重降低15%即可。

9．  与水迷宫不同，臂迷宫适合反复测试或长期记忆的测试。一般认为，工作记忆代表短期记忆，参考记忆代表长期记忆。

脑***组化实验

1. 灌注固定用的针头，一般都用***针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头，小鼠可用 6、7 号针头，但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。

2. 关于穿刺：灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内，但不宜进入升主动脉过长，在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可；灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可，不必要插入到升主动脉内。操作的要点是：，操作要迅速，剪开膈肌后，迅速沿腋前线剪开胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心脏；第二，一定要在明视野下操作，要剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部，确保穿剌针能进入升主动脉；第三，穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙，然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针；第四，穿刺方向要正确，从心尖部开始，从左下方斜向右上方，若遇阻力要改变方向再试，不要用力蛮插。

3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右，小鼠用 10ml 左右，一般以从右心耳流出的液体清亮为标准；4% 多聚甲醛用量约相当于老鼠体重，如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢，可持续 1-2 个钟头，也可以稍快。取脑后置脑块于 4% 多聚甲醛内 4 度后固定 4-6 个钟头。