广西细胞生物学实验服务为先 英瀚斯生物科技

细胞增殖检测

     本公司应用MTT比色法， 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二jia基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的Formazan，用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值，可间接反映huo细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。这种掺入可以稳定存在，随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。

     该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿liu药wu筛选、细胞毒性试验、以及肿liu放she敏***测定等。服务内容      1. 细胞接种：收到客户细胞后，我们会用细胞计数板计数细胞，得出细胞悬液浓度。计算出应稀释的倍数，按MTT***盒要求在96孔板内接种 相应浓度的细胞悬液；9(MMP-9)、TRAP和***蛋白酶K(CathepsinK)的表达进行检测结果共培养5天后可观TRAP(+)多核细胞形成13天TRAP(+)多核细胞数目达到高峰。

     2. 细胞培养：然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板，并实时观察细胞状态；  

     3. yao物处理并呈色：按不同浓度梯度加入yao物作用细胞；

     4. 溶解，比色：加入MTT检测***，按操作要求孵育相应时间，在mei标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。

关于细胞培养的常见问题

Q：培养液到底要不要加双抗（青&链）？

A：双抗不是细胞生长必需的。我们培养细胞时不常规使用，因为连续使用会促进耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在。一旦将从培养液中去除，这种轻度污染终将发展成为大规模污染。具体情况，可根据自己实验室的环境，自行决定是否使用双抗。

Q：细胞培养，能更换成其它种类的培养基吗？

A：我们强烈建议好使用细胞提供机构或细胞库推荐的生长培养液。有些细胞可能会适应在不同培养基中生长，在做好保种的条件下，可以分出部分细胞做测试。

Q:如何避免中沉淀物的出现？

A:首先要注意正确的解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：

（1）热灭活；

（2）在 37℃ 下培养；

（3）反复冻融；

（4）γ 射线照射；

（5）长期储存在 2-8℃；

（6）在室温下放置时间过长

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除这些絮状沉淀物，可以将分装到无菌离心管中，以  400g  离心，上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。

注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。