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发布时间:2022-07-24 13:50:37
实验步骤
1、实验之前,一定要确保高架十字迷宫整个装置的清洁。这个步骤不仅仅是要求当天的实验,更加侧重于每一次动物实验完成后的清洁除味工作,一定要去除上一只动物在宫体内遗留下来的尿液、粪便等,尽可能创造一个清洁、无味道的理想试验环境。同时,实验员需要记录动物的编号、日期、状态等信息;实验动物提前运送到行为学实验室临时笼架 ,
适应环境至少3H左右, 减少动物紧张。
2、将实验动物(大鼠或者小鼠)从饲养笼中取出,实验动物尽量背向实验员,将动物轻轻放在仪器宫体的***区域,动物面向开臂,然后实验员迅速安静的离开;
3、打开SuperMaze或者VisuTrack动物行为分析软件,跟踪动物在高架十字迷宫仪器内的轨迹运动,自动计算指标,通常实验时长为5min;
4、实验结束后,取出实验动物,放入饲养笼,做好实验完成动物的标记信息,同时,用酒精和纸巾清洁迷宫。
五、注意事项
1. 小宫设备和实验程序与大鼠类似,但迷宫规格应比大宫小,以免增加小鼠行为操作难度。
2. 本实验也可只用来测定工作记忆。方法中不同的是,在所有臂均放置食粒,而不是只选4个臂放置食粒。
3. 慢性应激对动物的迷宫操作可产生影响,且存在性别差异。经过慢性应激以后,雄性大鼠***减弱,表现为记忆错误频率增加;雄性大鼠的空间记忆反而增强,表现为错误频率减少。
4. 即使在限制进食条件下,也应让大鼠体重每周增加5g,以免动物因营养不良而患病。剔除身体状态不良的动物。
5. 迷宫周围的任何一件物品均可被动物用来作为空间定为的标志。去除或移动这些标志可能使动物操作困难并降低迷宫臂选择的准确性。
灌注固定主要用于***系统,其他***意义不是很大,而且耗时耗力。对***系统防止变性效果较好!
小鼠灌注
灌流固定小鼠时一般采用输液器的针头 (4 号半,这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白,针头要从心轴方向进针,然后刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了,开始灌流后剪破右心耳,约 40 毫升生理盐水,后再灌流约 20 毫升多聚甲醛,整个灌流固定的过程就完成了。
难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用镊子轻轻夹住心 外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢,针尖方向不要偏向右侧,以 免刺入右心房,如果感到有阻力,则将针退后、调整方向重新进针,直到进入主动脉,灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置,灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米,然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内,这样由于主动脉瓣的关闭,灌注液很难进入主动脉,而是沿着心室的切口流出,致使灌注失败。另 外,灌注针插入成功后,一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室,这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好,不能偏右使灌注针插入右心室。
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